(供四年制本科医学检验技术专业使用)
Ⅰ 前言
临床分子生物学检验技术是医学检验技术专业学生的一门重要专业课程。它是分子生物学与临床实验室医学（医学检验）广泛交叉和渗透形成的一个崭新的学科领域，是临床实验室医学中的前导技术，应用分子生物学技术，对人体内外源性或内源性基因的存在、结构或表达变化进行定性、定量分析，为疾病的预防、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据的一门学科，该技术在临床实验室医学中的广泛应用必将成为推动临床实验室医学各学科（生化、血液、免疫、微生物和临床检验）发展的重要力量。
临床分子生物学检验技术教学的目的是为适应21世纪临床实验室医学教育发展的需要，培养现代化医院需要的临床实验室医学专业的高级人才。通过本课程的学习，使学生全面理解分子生物学检验技术的基本理论和基本知识，培养学生具备分析问题和解决问题以及从事分子生物学检验的基本技能。其教学的总目标是为学生建立一个系统性强、架构清晰的分子生物学检验技术的知识体系。
本大纲适用于四年制医学检验技术专业本科学生使用。现将大纲使用中的有关问题说明如下：
一 为了使教师和学生更好地掌握教材，大纲每一章节均由教学目的、教学要求和教学内容
三部分组成。教学目的注明教学目标，教学要求分掌握、熟悉和了解三个级别，教学内容与教学要求级别相对应，并统一标示(核心内容即知识点以下划实线，重点内容以下划虚线，一般内容不标示)便于学生重点学习。
二 教师在保证大纲核心内容的前提下，可根据不同教学手段，讲授重点内容，介绍一般内
容，有的内容可留给学生自学。
三 总教学参考学时为42学时，其中理论22学时，实验20学时；理论课与实验课学时之比为1.1∶1。
四 教材：《临床分子生物学检验技术》，人民卫生出版社，吕建新、王晓春，1版，2015年。
II正文
第一章 绪论
一 教学目的
通过学习，掌握临床分子生物学检验和基因多态性分析的概念，熟悉常见的临床分子生物学检验技术及其应用，了解临床分子生物学检验技术的发展。
二 教学要求
(一)掌握临床分子生物学检验概念，基因多态性分析概念，个体化医学概念。
(二)熟悉常见的临床分子生物学检验技术及其应用，循环游离核酸检测意义。
(三)了解临床分子生物学检验技术的发展。
三 教学内容
(一)临床分子生物学检验技术的发展
1从分子生物学到临床分子生物学检验
2临床分子生物学检验技术的发展
(二)临床分子生物学检验技术的应用
1病原生物基因组
（1）菌种鉴定
（2）确定病毒感染和病毒载量
（3）病毒分析
（4）细菌耐药监测和分子流行病学调查
2基因变异
（1）致病基因的分子缺陷
（2）线粒体基因突变
（3）肿瘤相关基因
（4）DNA重排形成融合基因
3基因多态性
（1）基因定位和遗传病相关性分析
（2）药物代谢酶与血液浓度
（3）疾病诊断和遗传咨询
（4）多基因病的研究
（5）器官移植配型和个体识别
4循环游离核酸
（1）循环游离核酸与肿瘤
（2）游离核酸与产前诊断
（3）循环microRNA与肿瘤诊断
（三）临床分子生物学检验发展与应用
1临床分子生物学检验与感染性疾病诊断与治疗
2遗传性疾病的临床分子生物学检验
3肿瘤的临床分子生物学检验
4临床分子生物学检验与个体化医学
第二章 临床分子生物学检验标志物
一 教学目的
通过学习，掌握分子生物标志物的概念及分类，基因突变的概念及类型，熟悉病毒、原核生物、真核生物及人类基因组的结构及特征，了解分子生物标志物的特征。
二 教学要求
(一)掌握分子生物学标志物的概念及分类；核酸分子生物标志物的分类，基因突变的概念及类型；基因多态性的概念及分类；DNA甲基化的概念，转录产物标志物的类型和原理，循环核酸的应用。
(二)熟悉生物标志物的概念及分类，病毒、原核生物、真核生物及人类基因组的结果及特征，线粒体DNA生物标志物的特点，高通量技术与分子标志物的发现。
(三)了解分子生物标志物的特点，生物标志物发展的基本统计学方法和生物标志物的
评估阶段。
三 教学内容
（一）分子生物标志物的概念与分类
1生物标志物的概念与分类
2分子生物标志物的概念与分类
（1）DNA生物标志物
（2）RNA生物标志物
（3）蛋白质生物标志物
（二）核酸分子生物标志物
1基因组和基因组特征
（1）原核生物基因组
（2）病毒基因组
（3）人类基因组
2基于基因突变的分子生物标志物
（1）点突变
（2）插入／缺失突变
（3）动态突变
3基于基因多态性的分子生物标志物
（1）限制性片段长度多态性
（2）小卫星和微卫星多态性
（3）单核苷酸多态性
（4）拷贝数多态性
4基于DNA甲基化修饰的分子生物标志物
5基于转录产物的分子生物标志物
（1）mRNA标志物
（2）miRNA标志物
（3）长链非编码RNA标志物
6基于线粒体DNA的分子生物标志物
7基于循环核酸的分子生物标志物
（1）循环肿瘤细胞DNA
（2）母体血清中的胎儿DNA
（3）循环DNA的其他应用
（4）血浆RNA
（三）分子生物标志物的发现与评价
1高通量技术与分子生物标志物的发现
（1）基因组学
（2）转录组学
（3）蛋白质组学
（4）代谢组学
2 分子生物标志物的特征和评价估
（1）分子生物标志物的特征
（2）分子生物标志物评估的基本统计学方法
（3）生物标志物的评价阶段
第三章 临床标本处理与分离纯化技术（自学）
第四章 核酸杂交技术
一 教学目的
通过学习，掌握核酸分子杂交的类型和基本原理及临床应用，核酸分子探针的分类和标记方法和DNA芯片原理。熟悉影响核酸分子杂交的因素，了解DNA芯片在医学中的应用。
二 教学要求
(一)掌握Southern印迹杂交技术、Nouthern印迹杂交技术和荧光原位杂交的基本原理，核酸分子杂交的类型及临床应用，核酸分子探针的分类和标记方法和DNA芯片原理。
(二)熟悉影响核酸分子杂交的因素，核酸分子杂交的基本原理和分类。
(三)了解DNA芯片在医学中的应用和核算数据分析及其应用。
三 教学内容
（一）核酸分子杂交的概念
1核酸探针
（1）核酸探针的种类
（2）探针的长度
（3）核酸探针的标记
2分子杂交信号检测
（1）放射性标记探针检测
（2）非放射性标记探针的杂交检测
（二）经典的核酸分子杂交技术
1固相杂交
（1）反向点杂交原理和应用
（2）Southern印迹杂交原理和应用
（3）Northern印迹杂交原理和应用
2液相杂交
3原位杂交
（三）DNA芯片技术
1DNA芯片的概念
2DNA芯片原理
3DNA芯片技术
（1）芯片制备
（2）样品的制备
4杂交与结果分析
5 DNA芯片在医学中的应用
（四）影响杂交信号检测的因素
1探针的选择
2探针的标记方法
3探针的浓度
4杂交率
5杂交温度
6杂交的严谨性
7杂交反应时间
8杂交促进剂
第五章 核酸体外扩增及定性检测技术
一 教学目的
通过学习，聚合酶链反应的基本原理和过程、反应体系组成和扩增参数，熟悉PCR产物分析原理及主要临床应用，了解以PCR为基础的其他相关核酸扩增技术原理及应用。
二 教学要求
(一)掌握聚合酶链反应的基本原理和过程、反应体系组成和扩增参数，逆转录PCR、多重PCR、巢式PCR、转录依赖扩增，链置换扩增、bDNA扩增技术的原理及临床应用，靶序列扩增、探针序列扩增和信号扩增的概念。
(二)熟悉PCR-FRLP、PCR-ASO、PCR-SSCP等PCR产物分析原理及主要临床应用。
(三)了解以PCR为基础的其他相关核酸扩增技术如全基因组扩增、锚定扩增等靶序列扩增和其他探针序列扩增、信号扩增技术原理及应用。
三 教学内容
(一)靶序列扩增
1 PCR扩增技术
（1）PCR扩增技术原理及基本过程
（2）PCR反应体系及扩增参数
2其他PCR技术
（1）多重PCR
（2）序列特异PCR
（3）逆转录PCR
（4）巢式PCR
（5）转录依赖扩增系统
（6）随机引物PCR
（7）全基因组扩增
（8）微乳液扩增
（9）锚定扩增
（10） 长片段PCR
3PCR产物分析
（1）PCR-限制性片段长度多肽性
（2）PCR-等位基因特异性寡核苷酸
（3）PCR-单链构象多态性
（4）变性梯度凝胶电泳
（5）熔点曲线分析
(二)探针序列扩增
1连接酶链反应
2链置换扩增
3 Qβ复制酶
(三)信号扩增
1分支DNA
2杂交捕获法
3酶切依赖的扩增
4循环探针
第六章 核酸实时定量检测技术
一 教学目的
通过学习，掌握实时荧光定量PCR技术的原理，引物、探针的设计基本原理，以及相关结果的分析方法，熟悉临床基因扩增实验室的设置与人员资质要求，了解数字PCR技术。
二 教学要求
(一)掌握实时荧光定量PCR技术的原理，引物、探针的设计基本原理，实时荧光定量PCR相关结果的分析方法，实时荧光定量PCR反应体系和条件的优化。
(二)熟悉临床基因扩增实验室的设置与人员资质要求。
(三)了解数字PCR技术。
三 教学内容
(一)实时荧光定量PCR的基本原理
1实时荧光定量PCR中常用的概念
（1）扩增曲线
（2）荧光阈值
（3）循环数
（4）扩增效率
2PCR扩增的理论模式
3实时荧光定量PCR中的荧光化学物质
（1）荧光染料技术
（2）荧光探针技术
（3）数字PCR技术
（二）实时荧光定量PCR引物和探针的设计
1引物设计的基本原则
2探针设计的基本原则
（三）实时荧光定量PCR反应体系和条件的优化
1反应体系的优化
（1）模板的质和浓度
（2）引物和探针的浓度
2反应条件的优化
（1）退火温度
（2）循环次数
（四）实时荧光定量PCR测定的数据分析
1绝对定量
2相对定量
（1）标准曲线法的相对定量
（2）比较Ct法的相对定量
（五）临床基因扩增实验室的设置与人员资质要求
第七章 核酸序列分析（自学）
第八章 蛋白质组学技术（自学）
第九章 分子生物学检验新技术（自学）
第十章 病毒病的分子生物学检验
一 教学目的
通过学习，掌握病毒病的分子生物学检验策略，常见病毒的基因组结构特征和基因分型依据，熟悉病毒核酸定性及定量检测方法，病毒基因分型及其耐药性分析方法，了解病毒分子生物学检验的临床意义及研究进展。
二 教学要求
(一)掌握病毒病的分子生物学检验策略（一般性检出策略和完整性检出策略），常见病毒的基因组结构特征、基因分型依据。
(二)熟悉病毒核酸定性及定量检测方法，病毒基因分型及其耐药性分析方法。
(三)了解病毒分子生物学检验的临床意义，病毒分子生物学检验的研究进展，常见病毒脑要的分子机制。
三 教学内容
(一)病毒病分子生物学检验策略
1病毒病的一般检出策略
2病毒病的完整性检出策略
(二)乙型肝炎病毒的分子生物学检验
1乙型肝炎病毒的基因组结构特征
2乙型肝炎病毒的分子生物学检测方法
（1）HBV DNA的检测
（2）乙型肝炎病毒的基因分型
（3）乙型肝炎病毒的耐药分析
3分子生物学检验的临床意义
（1）HBV定量检测的临床意义
（2）HBV基因分型检测的临床意义
（3）HBV耐药性监测的临床意义
(三)丙型肝炎病毒的分子生物学检验
1丙型肝炎病毒的基因组结构特征
（1）5端及3端非编码区
（2）编码区
2丙型肝炎病毒的分子生物学检验
（1）HCV RNA的检测
（2）HCV基因分型
3分子生物学检验的临床意义
（1）检测HCV RNA
（2）检测HCV基因型
(四)人乳头瘤病毒的分子生物学检验
1人乳头瘤病毒的基因组结构特征
2人乳头瘤病毒的分子生物学检验
（1）人乳头瘤病毒的分型
（2）HPV DNA检测及基因分型
3分子生物学检验的临床意义
(五)人类免疫缺陷病毒的分子生物学检验
1人类免疫缺陷病毒的基因组结构特征
（1）LTR序列
（2）结构基因
（3）调控基因
2人类免疫缺陷病毒的分子生物学检验
（1）HIV RNA检测
（2）人类免疫缺陷病毒的分型
（3）人类免疫缺陷病毒的耐药性分析
3分子生物学检验的临床意义
(六)流行性感冒病毒的分子生物学检验
1流行性感冒病毒的基因组结构特征
2流行性感冒病毒的分子生物学检验
3 分子生物学检验的临床意义
第十一章 细菌感染性疾病的分子生物学检验技术（自学）
第十二章 其他感染性疾病的分子生物学检验技术（自学）
第十三章 单基因遗传病的分子生物学检验技术（自学）
第十四章 染色体疾病的分子生物学检验技术（自学）
第十五章 线粒体疾病的分子生物学检验技术（自学）
第十六章 肿瘤的分子生物学检验技术（自学）
第十七章药物代谢与毒副作用相关基因的分子生物学检验技术
一 教学目的
通过学习，掌握药物药物代谢酶的概念，，熟悉药物疗效和毒副作用相关基因的分类，了解临药物相关基因组学。
二 教学要求
(一)掌握药物药物代谢酶的概念，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6和TPMT的基因多态性、及分子生物学检验方法和相应的临床意义，G-6-PD基因变异和HLA-B*1502的分子生物学检验方法及临床意义。
(二)熟悉药物疗效和毒副作用相关基因的分类。
(三)了解药物相关基因组学。
三 教学内容
(一)药物代谢酶基因的分子生物学检验
1细胞色素P450
（1）CYP450的基因多态性
（2）CYP450基因的分子生物学检测
（3）临床应用
2二硫嘌呤S-甲基转移酶
（1）TPMT的基因多态性
（2）TPMT基因的分子生物学检测
（3）临床应用
(二)药物毒副作用相关基因的分子生物学检测
1葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症
（1）分子机制
（2）分子生物学检测及临床应用
2HLA-B1502
（1）分子机制
（2）分子生物学检测及临床应用
第十八章 移植配型及个体识别的分子生物学检验技术（自学）
第十九章 胚胎植入前分子生物学检验技术（自学）
第二十章 临床分子生物学检验质量控制
一 教学目的
通过学习，掌握室内质量控制的概念，统计学质量控制的方法和室内质控数据评价，熟悉实验室的设施和环境设置，检验性能评价，室间质量评价的概念，了解室内质量控制和室间质量评价的局限性。
二 教学要求
(一)掌握全过程质量控制的各环节，室内质量控制的概念，统计学质量控制的方法和室内质控数据评价。
(二)熟悉实验室的设施和环境设置，检测方法的选择，检验性能评价，试剂盒和耗材的质量检验，室间质量评价的概念。
(三)了解室内质量控制的局限性，室间质量评价的目的、程序设计，质评样本组合设计的原则和室间质量评价的局限性。
三 教学内容
（一）临床分子生物学实验室的设施与环境
（二）检测方法与性能评价
1检测方法的选择
2检测性能评价
（三）仪器和外部供应品
1仪器和外部供应品的选择和使用原则
2仪器设备的管理
3标准品和质控品
（1）标准品
（2）质控品
4试剂盒和耗材的质量检验
（1）试剂盒的质量检验
（2）耗材的质量检验
（四）质量体系文件
（五）仪器和检测系统的维护，功能检查和校准
（六）全过程质量控制
1分析前质量控制
2分析中质量控制
3分析后质量控制
（七）室内质量控制
1统计学质量控制
2室内质量控制数据的评价
（1）失控原因的分析与处理
（2）阴性质控品失控的原因，处理与预防措施
（3）阳性质控品失控的原因，处理与预防措施
（4）室内质控数据的周期性评价
3室内质量控制的局限性
（八）室间质量评价
1室间质量评价的目的
2室间质量评价的程序设计
3室间质量评价样本的组合设计原则
4室间质量评价的局限性
Ⅲ教学组织与方法
一 实施机构：由医学检验系临床生物化学检验教研室执行。
二 组织内容：教案和讲义审核、集体教学备课、教学方法研究、教学手段应用。
三 教学方法：
1． 理论教学：以启发式为主，注重培养学生的自学能力。强调课前预习，课后复习，养成
良好的学习习惯。根据不同章节内容和学生学习的具体情况，采取有效的教学方式。除课堂讲授外，可采用自学、组织讨论等不同形式进行教学。对学有余力的学生，除要掌握必要的基本概念和基本理论外，还要提高他们的课外阅读参考资料的能力。
2． 实验教学：注重培养学生动手能力和应用所学知识分析问题和解决问题的能力，培养学
生严谨、实事求是的科学作风。通过实验使学生扎实地掌握临床分子生物学检验验技术的基本原理、方法和注意事项，掌握的本领应用所学知识分析问题和解决问题的本领。实验教学强调规范性、严谨性和创新性。以技能性培训加强学生基本技能训练，以综合性、设计性实验加强学生创新思维和创新能力的培养，夯实基础，开拓创新。
3．各相关教学部门要做好教学保障工作，保证实验仪器设备正常运行、材料供应；课前准备要充分，通过集体备课、试讲、预试验等不断提高教学质量，保证上好每堂课、做好每个试验。
4.辅导形式：可采用辅导讲义、课堂答疑、网络互动等方式进行辅导。
四 考核办法：理论考试实行闭卷考试。成绩计算：理论考试占60%，实验报告占25%，平时作业占10%，考勤占5%。
Ⅳ 教学时数分配表
| 讲课内容 |
教学手段 |
时数 |
实验内容 |
时数 |
类型 |
| 绪论 |
多媒体 |
2 |
|
|
|
| 临床分子生物学检验标志物 |
多媒体 |
4 |
全血基因组DNA的提取及琼脂糖凝胶电泳鉴定DNA片段 |
4 |
综合型 |
| 核酸杂交技术 |
多媒体 |
4 |
导流杂交基因芯片技术进行人乳头瘤病毒分型 |
4 |
综合型 |
| 核酸体外扩增及定性检测技术 |
双语教学 |
2 |
全血基因组RNA的制备与鉴定 |
4 |
验证型 |
| 核酸实时定量检测技术 |
多媒体 |
2 |
实时荧光定量PCR技术检测 乙型肝炎病毒核酸 |
4 |
综合型 |
| 病毒病的分子生物学检验技术 |
多媒体 |
4 |
实时荧光定量PCR技术检测丙型肝炎病毒核酸 |
4 |
综合型 |
| 药物代谢基因与毒副作用相关基因的分子生物学检验技术 |
多媒体 |
2 |
|
|
|
| 临床分子生物学检验质量控制 |
CBL |
2 |
|
|
|
| 合计 |
|
22 |
|
20 |
|
